华通氏胶

什么是华通氏胶

华通氏胶（Wharton'sJelly）是构成脐带的凝胶状物质，主要成份为黏多糖（Mucopolysaccharides），也含有成纤维细胞和巨噬细胞，是一种黏膜组织。当婴儿分娩后，温度的改变使华通氏胶内部的结构发生蹋陷，从而钳住脐带内的血管，此过程一般持续约五分钟。华通氏胶内的部份细胞具有干细胞的特质。

华通氏胶的功能

华通胶含水量丰富，来自胚外中胚层的胶样胚胎结缔组织，具有保护血管的作用，组织学检查时可见其中含有大量的胶原及弹力纤维以及一些平滑肌。羊水有保护胎儿、缓冲外界压力，尤其在产时避免宫缩时子宫壁和胎儿对脐带的直接压迫，还有维持胎儿体液平衡的作用。

华通胶含量的多少，既脐带胶质层厚度，对羊水过少孕妇的分娩方式起到一定决定作用。产程中阵发性宫缩使宫腔内压力骤升，羊水起缓冲压力的作用，避免宫壁、胎儿直接压迫脐带，脐血管闭合，胎儿缺血缺氧，但对羊水过少或缺如者，羊水的保护作用消失，胶质层即华通胶对脐血管的保护作用才得彰显。华通胶中含很多水分，但其渗透压十分稳定，更有利于缓冲外界压力，避免脐血管的受压、闭合，导致胎儿缺血缺氧。

华通氏胶的临床剥离方法

整个操作过程中必须无菌操作，避免染菌。

1、脐带取回来以后首先用含双抗的PBS或者加双抗的生理盐水清洗脐带表面；

2、用剪刀减掉脐带两端1-2厘米左右，弃掉不用；

3、继续用生理盐水清洗脐带，用镊子尽量将脐带里面的血清洗干净；

4、将脐带剪成2CM左右的小段，长短自己决定，操作熟练可以长一点，新手短一点；

5、将脐带剖开，去除两根动脉，一根静脉，用镊子撕取华通胶；

6、将华通胶放入离心管内用剪刀剪碎1mm3左右，转入培养瓶，均匀铺开，贴壁培养。

华通氏胶中脐带间充质干细胞的作用

华通氏胶组织中富含脐带间充质干细胞，具有间充质干细胞的所有功能特征，其来源丰富，也不存在伦理问题。脐带间充质干细胞可以作为治疗组织器官衰老和病变理想的种子细胞，可以保存以作不时之需，脐带间充质干细胞越来越受到人们的重视。

脐带间充质干细胞（huc-MSCs）是存在于脐带华通氏胶（Wharton’sjelly）和血管周围组织中的一种间充质干细胞。来源于脐带的间充质干细胞因其取材方便，无道德伦理争议，可获取的细胞数量多、增殖能力强、免疫调节作用大，分泌细胞生长因子的总量也非常高，便于扩增和传代，同时又没有配型、排异等问题，极其适合用于临床研究和应用，是间充质干细胞的理想来源。

华通氏胶脐带间充质干细胞的制备方法

针对现有获取人脐带华通氏胶间充质干细胞的方法提取率低、纯度低的问题，提供一种人脐带华通氏胶间充质干细胞的制备方法，从脐带组织中提取人脐带华通氏胶间充质干细胞的提取率高，纯度高、活性好。

1.脐带华通氏胶组织预处理：将分离的脐带华通氏胶组织剪为1～2mm3组织碎块；

2.第一次消化：取所述组织碎块与组织消化液混合进行第一次消化，消化后离心，去除上清液，保留沉淀，加入含有双抗的完全培养基进行重悬，得到悬液；所述组织消化液包括I型胶原酶和Ⅲ型胶原酶；

3.第二次消化：将悬液分装培养，用胰蛋白酶进行第二次消化，消化后离心，去除上清液，保留沉淀，加入含有双抗的完全培养基进行重悬，得到脐带间充质干细胞悬液；

4.培养：将所述脐带间充质干细胞悬液分装，继续培养，即得人脐带华通氏间充质干细胞。

上述制备方法，对脐带组织采用两步消化，能够更充分的消化脐带组织，最大限量的获得脐带间充质干细胞，得到的脐带华通氏间充质干细胞得率高、纯度高、活性好，有利于应用于临床。以下是实验观察：

1、在其中一个实施例中，所述脐带华通氏胶组织预处理中，分离脐带华通氏胶组织的步骤为：用组织保护液将清洗脐带组织的血液清洗干净，去除静脉和动脉，分离出粘滑的透明胶状物，即脐带华通氏胶；所述组织保护液为包括0.5wt％～1.5wt％庆大霉素和0.5wt％～1.5wt％两性霉素B的生理盐水。

2、所述第一次消化步骤中，消化的时间为2～3min，消化后在3～5℃下离心，离心转速为800～1100rpm，离心时间为4～6min。

3、所述组织消化液中I型胶原酶的浓度为0.7～1.1g/mL，III型胶原酶的浓度为0.4～0.8g/mL，溶剂为PBS溶液；所述组织消化液的添加量为与所述组织碎块等体积。优选地，I型胶原酶和III型胶原酶的浓度比为3:2。

4、所述完全培养基中的双抗为0.5～1.0μg/mL庆大霉素和0.5～1.0μg/mL两性霉素B，所述完全培养基中还包括8wt％～12wt％细胞因子。优选地，完全培养基中细胞因子的含量为10wt％。

5、所述第二次消化步骤中，将悬液分装至T75培养瓶中，在温度为37±0.5℃，CO2浓度为5％±0.5％环境下进行培养，待细胞生长融合至60％～70％后，再加入胰蛋白酶进行第二次消化。

6、所述组织碎块在未使用时，分装至冻存管，并加入细胞冻存液，程序降温至-80～-90℃后放置于液氮中保存。

7、所述人脐带华通氏间充质干细胞在未使用时，分装至冻存管，加入细胞冻存液，程序降温至-80～-90℃后放置于液氮中保存。

8、在其中一个实施例中，所述冻存液的成分为：甘油、甘露醇和含有双抗的DMEM，甘油、甘露聚糖和含有双抗的DMEM的质量比为1:(2～3):(6～7)。优选地，甘油、甘露聚糖和含有双抗的DMEM的质量比为2:5:13。传统的冻存液中含有DMSO，复苏后运用于临床时，DMSO残留会造成被治疗患者出现恶心、呕吐等症状，本发明的冻存液可以避免上述副作用的产生，并且加入甘露醇能够为细胞培养提供营养成分。细胞冻存液放置于4℃下保存。

华通氏胶间充质干细胞的优势

脐带华通氏间充质干细胞，具有纯度高、活性高的优点，有利于应用于临床。

华通氏胶间充质干细胞，也叫脐带间充质干细胞（MSCs）具有较高的分化潜能，可向多个方向进行分化。它在骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、内皮和心肌等组织工程方面具有广阔的临床应用前景。有报道从人脐带中分离出MSCs，且细胞含量、增殖能力优于骨髓MSCs，免疫原性比骨髓MSCs低，并且具有取材方便，无伦理学争议等优点，因此越来越受到研究工作者们的关注。干细胞的培养体系主要应用含动物血清（如胎牛血清）的培养基，在此种环境下生长的干细胞，其内部结构会发生何种变化尚未可知，为避免含动物血清培养中病毒等病原体污染和异种血清所致的过敏反应，课题组进行了以人脐带血血清为主体的培养体系体外培养扩增脐带间充质干细胞的实验研究。以探讨人脐带血血清替代动物血清用于培养临床组织工程用干细胞的可行性。同时研究脐带间充质干细胞形态学、生长特性、细胞周期、免疫表型等特性，旨在建立脐带间充质干细胞的富集方法，为建立脐带间充质干细胞库和临床应用提供有力的理论依据。

华通氏胶脐带间充质干细胞的用途

一、能具有较强的免疫调节作用，可用于治疗红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病，降低细胞或器官移植后的免疫排斥反应，提高细胞或器官移植的成功率；

二、能促进造血恢复功能，与单一造血干细胞移植比较，间充质干细胞和造血干细胞共移植能显著提高白血病和难治性贫血等疾病的治疗效果；

三、能修复损伤或病变的组织器官，用于治疗骨和肌肉衰退性疾病、心脑血管疾病、肝病、脑及脊髓神经损伤和老年痴呆等。

华通氏胶脐带间充质干细胞的储存　

华通氏胶脐带间充质干细胞是目前医学界采用率很高的疾病治疗的“原材料”，在抗衰老、提高健康水平、免疫调节、组织器官修复、再生医学以及未来应对各类难治疾病(比如自身免疫性疾病、代谢性疾病、神经系统疾病、心血管疾病等)方向都有很大应用潜力。由于其免疫原性低，干细胞适用性极高，储存了宝宝的脐带干细胞，全家人皆可使用。

储存流程对于产妇和宝宝来说非常简单和安全。在分娩后，只需要助产士或护士按照要求将含有华通氏胶的脐带剪断，放到专用的采集瓶后，由专职人员送至专业的细胞制备实验室即可。所以，这种干细胞样本的采集方式，实际上是对分娩附属品的一种再利用，同时，是一种无侵入性的采集方法：供者无痛苦，对母婴无伤害。脐带送到细胞制备实验室后，由技术人员对其进行华通氏胶剥离及细胞制备、检测和入库冻存，最后完成珍贵生命资源的长久保存。

一根脐带提取的华通氏胶脐带间充质干细胞的数量相当于成人5000毫升骨髓中的间充质干细胞数量，且质量优、活性高、更纯净，可多次使用；脐带间充质干细胞家庭成员亦可应用，使用时无需配型，亲缘关系越近治疗效果越好。

保存华通氏胶如同保存生命的种子，在日后能使垂危的或衰老的生命重获新生。为孩子和家庭保存一生只有一次珍贵的华通氏胶，为孩子留下一份保障，更留下一份希望。

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