小鼠骨髓间充质干细胞的培养流程（骨髓间充质干细胞作用）

在全部的诊疗试验室中，培养细胞是最基本上的实际操作，假如要制取骨髓间充质干细胞，就务必彻底无菌操作原则，并留意完全培养基中的血清蛋白浓度值，并且要防止损害细胞。下边就讨论一下小鼠骨髓间充质干细胞的培养流程。

小鼠骨髓间充质干细胞的培养流程

1、试验提前准备

手术室器械、细胞培养皿、离心管、移液枪等放进无菌检测净化工作台，以紫外线照射30min。选择休重120g上下的SD小鼠，断颈解决。将小鼠放置75%的酒精中泡浸4min。

2、细胞获取

（1）以75%酒精擦拭操作台和两手。在净化工作台解剖学大白鼠取下股骨头与踝关节，置放于无菌检测PBS中。

注：实际操作中，可应用无菌纱布擦拭骨表层肌肉组织，将肌肉组织去除整洁，防止肌细胞环境污染，提升所分离出来间充质干细胞美容的纯净度。

（2）用无菌检测PBS泡浸清理，进一步除去骨表层结蹄。弄断两边骨垢线，曝露骨髓腔，置放于10mlDMEM完全培养基（10%FBS，1%P/S）的无菌检测细胞培养皿中。

（3）取注射针，用医用镊子钳起骨骼，注射针汲取DMEM彻底细胞培养液清洗骨髓腔，由一端骨髓腔清洗骨髓，反复3-5次，再反向清洗骨髓腔，反复3-5次。直到骨髓腔清洗液变清澈后终止。

（4）吹打骨髓腔清洗液，便于于分散化细胞，搜集清洗液于15mL离心管中，2000r/min室内温度抽滤5-10min。

（5）抽滤后去上清，用8米LDMEM彻底细胞培养液重悬，轻轻地吹打，做成单细胞悬液，迁移至培养瓶/皿中，轻轻地混匀。放置37℃、5%的CO2恒温箱中培养。

3、观察

等候24小时，镜下观察，由此可见球型的大白鼠骨髓中的血红细胞浓度值大，飘浮于细胞培养液中并有小量血红细胞集聚结团。进行换液，除去飘浮的红细胞，之后每三四天换液另外观察记录表。约7-10天后，显微镜下可观察到细胞形状与生长发育状况优良，飘浮细胞很多降低，贴壁细胞总数显著增加，繁衍结合达80%~90%后可进行细胞传代。

4、细胞传代

待贴壁细胞结合至80%上下时进行传代，弃去细胞培养液，无菌检测PBS轻轻地清洗后，吸去PBS。选用含EDTA胰酶消化吸收3-四分钟，骨髓间充质干细胞贴壁特点强，难消化吸收，胰酶可适度提升EDTA浓度值的方式，显微镜下由此可见细胞发皱变圆，停止消化吸收。

5、检验

细胞传代到第三-4代时，细胞形状均一，呈长梭形集落样分布，细胞纯净度可以达到85%之上。这时细胞可用以事后试验，或选用流式细胞筛分仪挑选表层标识物进一步认证：认证规范为CD34呈阴性，CD44呈阳性。

骨髓间充质干细胞的作用与难题

骨髓间充质干细胞做为存有于骨髓栽培基质中的干细胞美容，能诱发分裂为破骨细胞、软骨组织细胞和脂肪组织等。来源于自身骨髓的间充质质干细胞美容可以非常好地防止或减少自体间移殖的免疫排斥反映，在临床医学上已经运用于肝硬化腹水、心血管损伤和新生儿软骨组织等病症上，并获得了优良的功效。但骨髓间充质干细胞取样较艰难，环境污染率高，且伴随着年纪脆化细胞总数和分裂工作能力相对性降低和变弱，因此现阶段限定其临床医学运用。

但现阶段还是有的病人务必根据骨髓间充质干细胞进行医治，坚信伴随着人们对骨髓间充质干细胞的进一步科学研究，一定会攻破运用上的众多难点，让大量的病人可以痊愈。

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